2. 器材 载玻片、接种环、酒精灯。

　　3. 方法 待检菌为纯培养物，取洁净载玻片 l块，一端滴生理盐水 l滴，另一端滴加诊断血清 l滴。用接种环沾取待检菌的纯培养物少许，分别和生理盐水、诊断血清混匀，将载玻片轻轻反复摆动，注意勿使试验区和对照区相互混合。静置数分钟后观察结果。待检菌为病龟的内脏器官或病灶部位，取一小块内脏或病灶组织分别在载玻片的两端涂抹，然后一端滴加生理盐水一滴，另一端滴加诊断血清一滴。按上法所述轻轻地振动载玻片。数分种后观察结果。

　　4. 判断 载坡片上如若出现乳白色凝集块者即为阳性反应(即有该病原菌)，如为均匀的乳白色而无凝集块者为阴性反应(即无此病原菌)，生理盐水对照滴则为均匀的乳白色。

　　五、病原分离

　　为了对龟病作出确诊，尤其是细菌性和病毒性龟病，可进行病原分离。通过病原分离，病原的纯培养，可获得大量的病原体，然后根据病原体的形态特征，生化特征以及血清学特征，对龟病作出准确的判断。

　　1. 病毒分离 以无菌的方法取濒死或刚死龟的肝、脾、肺、肾等内脏组织，用每毫升含800～1000国际单位(或毫克)双抗的 Hanks液洗3次，然后研磨匀浆成1：10悬液，冻融3次，离心取上清液，使其通过细菌滤器，将滤液接种于敏感细胞，观察能否使其致细胞病变；或者滤液经超速差异离心或密度梯度离心后，在电镜下进行观察。

　　2. 细菌分离 将濒死或刚死的病龟的病灶部位用无菌的生理盐水冲洗3次后，取深层的组织接种于适宜的培养基上；或将病龟用无菌生理盐水冲洗之后，以无菌的手段打开背腹甲，取腹水或肝、脾、肾等内脏组织接种于适宜培养基，经28℃～30℃培养24～48小时后，进行分纯。然后观察菌落的形态，菌体的特征，并利用糖类代谢，氨基酸和蛋白质代谢，有机酸和铵盐，呼吸酶类，毒性酶类，抑菌，美蓝还原，中性红，胆汁(胆盐)溶菌，嗜盐性等生理生化试验对其进行鉴别，或者用血清学试验进行鉴定。

　　3. Hanks液的配制：
　　① NaCl 8克、KCl 0.4克、MgSO47H2O 0.1克、MgCl·6H2O 0.1克溶于800毫升重蒸馏水中；
　　② CaCl2(无水)0.14克溶于100毫升重蒸馏水中；
　　③ 葡萄糖1.0毫克、NaHPO4 0.154克、KH2PO4 0.06克、0.4%酚红液 5毫升溶于100毫升重蒸馏水中。将上述3种溶液混和，8磅30分钟灭活菌，或用玻璃滤器过滤。保存在5℃备用，用前以5%NaCO3调pH。

　　六、高免血清制作

　　制作血清选用的动物，一般为家兔或羊，要求从非疫区采购，体形较大的成年动物，体质健壮。

　　基础免疫：将预定剂量的抗原注射到动物体内，7天后再以较大剂量进行第2次免疫。
　　高度免疫：2周后，用强毒反复接种动物，进行攻击，间隔时间3～10天，直至达到要求的效价。
　　血清提取：于大玻璃圆筒内加入少量生理盐水(高压灭菌)，在无菌操作下采血，室温静置凝固，然后在血凝块上放上灭菌的不锈钢砣，令血清自然析出。

　　制备的抗血清既可用于治疗疾病，又可用于血清诊断。抗血清具有高度的特异性，一种血清只能针对一种病院微生物起作用。用于治疗时　　能很快产生被动免疫，但维持时间不长，一般只有2～3周，因此注射血清2～3周后需再接种疫苗。注射方法一般以肌肉注射(程天印等，养龟与龟病防治新技术)。

　　七、高免血清的应用

　　尽管这种方法在龟病的诊断与治疗上应用还不普遍，但前景广阔。这一新技术在养鳖中已经开始应用。1996年虞蕴如、李克敏在《水产养殖》杂志上报道，他们在1995年10月对某场的病鳖进行血清学鉴定，将不同症状的的鳖肝脏或肺脏作玻璃触片，加一滴已知几种血清型的嗜水气单胞菌混合诊断血清，轻轻摇动玻片，1分钟之内即发生特异性凝集

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